送样要求

愈伤组织样品

样品选择:选择相同培养条件下,同一培养基培养的不同区域的样品(可以来源不同培养容器),选择 3-6 个区域的样品混合成一个生物学重复;

样品收集:从培养基取出培养过程中的愈伤组织,去除样品中混杂的褐化或者已经形成为叶片、茎等组织的部分(红色方框标记的部分);

样品保存 :将同一个生物学重复的样品处理完成后,取 0.6g 放置在适宜大小的离心管中(5ml/10ml),并在管盖和管壁做好标记,液氮中速冻 15min 后,-80℃冰箱暂时保存;

样品寄送:预约干冰进行样品寄送,由于温度不同,干冰挥发的程度不一样,建议按照每天 5kg 干冰进行计算,一般快递时效性在三天,约需要 15-20kg 左右干冰,准备足量的干冰避免样品冻融。

样本备份:为确保实验的顺利,建议样品备份 1-2 份,避免部分样品降解需要重新取材、制备、送样,耽误实验的时间。

大型真菌样品

样品选择:对生长中的大型真菌样品(野外或培养型)的不同生长周期进行选择,根据大型真菌生长状态进行区分,选择 6 个以上的单个菌体进行一个生物学样品的混合;

样品收集:从培养基或者野外采集好真菌样品,使用 PBS/RNase-free 水对菌体进行清洗,去除菌体上的土壤、培养基等杂质,将菌体沿垂直轴的中心线进行切割,切割成 1-2cm 大小的块状;

样品保存 :将同一个生物学重复的样品切割完成后,取 0.6g 放置在适宜大小的离心管中(10ml/15ml),并在管盖和管壁做好标记,液氮中速冻 15min 后,-80℃冰箱暂时保存;

样品寄送:预约干冰进行样品寄送,由于温度不同,干冰挥发的程度不一样,建议按照每天 5kg 干冰进行计算,一般快递时效性在三天,约需要 15-20kg 左右干冰,准备足量的干冰避免样品冻融。

样本备份:为确保实验的顺利,建议样品备份 1-2 份,避免部分样品降解需要重新取材、制备、送样,耽误实验的时间。

藻类样本

样品选择:选择液体培养基培养的藻类样品;

生长周期确认:使用分光光度计对生长中的藻类样品进行OD值测定,选择藻类生长的最优时期;也可以使用细胞计数仪对培养基中藻体浓度进行测定,一般推荐生长的浓度达到 1×106-1×107;

样品收集:取一定体积培养液样品于离心管(10ml/15ml/50ml)中,使用 4℃、8000g 进行离心 5-10min,去除上清;收集藻体也可以使用抽滤机进行;

样品清洗:加入适宜体积预冷的去离子水,去离子水的体积约为沉淀的 2-3 倍,震荡混匀,充分震散块状的藻体后 4℃、8000g 进行离心 5-10min,去除上清,该清洗步骤重复 2 次,共清洗 3 次,清洗完成后将样品置于液氮中速冻 5-10min,-80℃冰箱保存;

样品寄送:预约干冰进行样品寄送,由于温度不同,干冰挥发的程度不一样,建议按照每天 5kg 干冰进行计算,一般快递时效性在三天,约需要 15-20kg 左右干冰,准备足量的干冰避免样品冻融。

样本备份:为确保实验的顺利,建议样品备份 1-2 份,避免部分样品降解需要重新取材、制备、送样,耽误实验的时间

花样品

样品选择:优先选择正常生长发育的植株(因为胁迫处理使得植株生长状态较差的也可以进行取样,尽量避免选择因为处理时间过久已经死亡的植株),从培养植株中选择 3-6 株长势一致植株作为一个生物学重复样品的来源,避免因为个体差异过大 带来的差异;根据实验目的选择花开放的不同时期(花苞、初开、盛开期等);

样品收集:从选定为一个生物学重复来源的不同植株的花组织中,选取 5-6 瓣花瓣(若花的数目不多,可以多选择几瓣,由于花瓣的含水量较高,尽量取得样品量多一些)混合形成一个样品;

样品保存 :装入大小适合的离心管中,液氮速冻 5-10min,-80℃冰箱保存;

样品寄送:预约干冰进行样品寄送,由于温度不同,干冰挥发的程度不一样,
建议按照每天 5kg 干冰进行计算,一般时效性在三天,约需要 15-20kg 左右干冰,准备足量的干冰避免样品冻融。

样本备份:为确保实验的顺利,建议样品备份 1-2 份,避免部分样品降解需要重新取材、制备、送样,耽误实验的时间。

果实样品

样品选择:优先选择正常生长发育的植株(因为胁迫处理使得植株生长状态较差的也可以进行取样,尽量避免选择因为处理时间过久已经死亡的植株);从培养植株中选择 3-6 株长势一致植株作为一个生物学重复样品的来源,避免因为个体差异过大带来的差异;

样品收集:从选定为一个生物学重复来源的不同植株相对应的同一位置(光照同一方向等)上,选取 1-2 个果实,使用手术刀分离出果实中研究的部分,关注果皮则使用手术刀尽可能少带一些果肉取得果皮,关注果肉则剔除果皮后将果肉切割成 1-2cm 的块状进行混合,带核的果实不关注果核需要尽可能去除果核,带种子的果实不关注种子则需要去除种子;

样品保存 :装入大小适合的离心管(15ml/50ml)中,液氮速冻 5-10min,-80℃冰箱保存;

样品寄送:预约干冰进行样品寄送,由于温度不同,干冰挥发的程度不一样,建议按照每天 5kg 干冰进行计算,一般时效性在三天,约需要 15-20kg 左右干冰,准备足量的干冰避免样品冻融。

样本备份:为确保实验的顺利,建议样品备份 1-2 份,避免部分样品降解需要重新取材、制备、送样,耽误实验的时间。

根系样品

样品选择:优先选择正常生长发育的植株(因为胁迫处理使得植株生长状态较差的也可以进行取样,尽量避免选择因为处理时间过久已经死亡的植株);从培养植株中选择 3-6 株长势一致植株作为一个生物学重复样品的来源,避免因为个体差异过大带来的差异;

样品收集:从培养土或者试验田中挖出植株,在流水中冲洗干净培养土及其他杂质后,用 PBS/RNase-free 水清洗根系 1-2 次,用手术刀切割下根系组织,用吸水纸吸干根上的水分;

样品保存:装入大小适合的离心管中(10ml/15ml/50ml),液氮速冻 5-10min,-80℃冰箱保存;

样品寄送:预约干冰进行样品寄送,由于温度不同,干冰挥发的程度不一样,建议按照每天 5kg 干冰进行计算,一般时效性在三天,约需要 15-20kg 左右干冰,准备足量的干冰避免样品冻融。

样本备份:为确保实验的顺利,建议样品备份 1-2 份,避免部分样品降解需要重新取材、制备、送样,耽误实验的时间。

叶片、茎样本

样品选择:优先选择正常生长发育的植株幼嫩部位(因为胁迫处理使得植株生长状态较差的也可以进行取样,尽量避免选择因为处理时间过久已经死亡的植株),从培养植株中选择3-6 株长势一致植株作为一个生物学重复样品的来源,避免因为个体差异过大带来的差异。

样品收集:从选定为一个生物学重复来源的不同植株相对应的同一位置(光照同一方向等)上,选取 3-4 片叶片(根据大小进行数目调整)或者 1-2 节茎组织进行混合,过长的茎秆使用手术刀进行切割,切割为 1-2cm 长度,过大的叶片可以经过液氮速冻后稍微碾碎一点。采集时建议用 PBS/RNase-free 水擦拭或冲洗干净,再用吸水纸吸干样品表面。

样品保存:装入大小适合的离心管中(10ml/15ml),液氮速冻 5-10min,-80℃冰箱保存;

样品寄送:预约干冰进行样品寄送,由于温度不同,干冰挥发的程度不一样,建议按照每天 5kg 干冰进行计算,一般时效性在三天,约需要 15-20kg 左右干冰,准备足量的干冰避免样品冻融。

样本备份:为确保实验的顺利,建议样品备份 1-2 份,避免部分样品降解需要重新取材、制备、送样,耽误实验的时间。

血清、血浆样本的分装

  一、如果为采集全血后直接离心分装,则步骤如下:

  血浆样本的分装:

  1.用 EDTA/肝素抗凝的采血管采集完血液后,颠倒混匀;

  2.在 4℃条件下 3000 rpm 离心 10 min;

  3.编号好分装需用的离心管;

  4.离心完后取出上层血浆,按所得血浆体积分装,每份 100 μL;

  5.将分装后的样本按顺序分别用冻存盒装好,-80℃保存。

  血清样本的分装:

  1.用未加抗凝剂的采血管采集完血液后,静置 30 min;

  2.在 4℃条件下 3000 rpm 离心 10 min;

  3.编号好分装需用的离心管;

  4.离心完后取出上层血清,按所得血清体积分装,每份 100μL;

  5.将分装后的样本按顺序分别用冻存盒装好,-80℃保存。

  二、如果为以前保存好的血清或血浆需要分装,则步骤如下:

  1.将血清或血浆样本放在冰上解冻;

  2.编号好分装需用的离心管;

  3.解冻好后按样本体积分装,每份 100μL;

  4.将分装后的样本按顺序分别用冻存盒装好,-80℃保存。

  注意事项

  氧化脂质检测样本需密封避光保存。

脑脊液样本的收集

  样本量要求 400 uL/样。脑脊液的采集通常采取脊髓穿刺法:动物轻度麻醉后,侧卧位固定,使头部及尾部向腰部尽量弯曲,剪去第七腰椎周围的被毛。消毒后操作者在动物背部用左手姆、食指固定穿刺部位的皮肤,右手持腰穿刺针垂直刺入,当有落空感及动物的后肢跳动时,表明针已达椎管内( 蛛网膜下腔),抽去针芯,即见脑脊液流出。如果无脑脊液流出,可能是没有刺破蛛网膜。轻轻调节进针方向及角度,如果脑脊液流的太快,插入针芯稍加阻塞,以免导致颅内压突然下降而形成脑疝。收集到的样本分装成 100uL 每管,放入-80℃冰箱保存。

唾液样本的收集

  样本量要求 500 uL/样。在采集唾液样本前 30 分钟,用饮用水将口腔内的杂物洗漱干净,用舌尖抵住上颚或下颚齿根以富集唾液,向采集漏斗中轻轻吐入唾液,直至液体唾液(非气泡)达到刻度线高度,手持唾液采集管,令其处于直立,并用另一只手协助将采集漏斗选下,从采集管底部取下采集管管盖,并用管盖将采集管拧紧,上下颠倒采集管几次,使唾液与唾液保存液充分混匀,将样本分装成 100uL 每管,放入-80℃冰箱保存。

肠道内容物的收集

  样本量要求 1g 左右。在实验对象死亡后,用无菌解剖刀,在无菌状态下取出整个肠道,切取所需肠段的内容物(条件允许的话,可在无菌操作台进行),用无菌手术刀挖取内容物,立即放在冰上进行分装并标记,若需要重复测样,需要对样本进行分装,避免反复冻融,采集好的样本立刻放入-80℃冰箱进行低温保存。

细胞的制备

  样本量要求细胞个数>1×107个/样,贴壁细胞需要先用胰酶消化或用细胞刮将细胞刮下,样本转移到EP管中,4℃,1000 rpm离心10 min,吸出上清液,将收集到的细胞用适量4℃预冷的PBS清洗,用移液器轻轻吹打,避免剧烈振荡造成细胞破碎,4℃,1000 rpm离心10 min收集细胞,尽量将水分吸干,收集到的细胞放入-80℃冰箱进行低温保存。

粪便的制备

  1)人粪便样本的采集

  将粪便排泄到干净的容器中,尽量避免尿液、马桶壁等对粪便样本的污染, 取同段样本或将所有样本混匀后再取样,用无菌勺对粪便进行挖取,将适量粪便样本放入无菌保存管中,样本需 1g 左右,对样本进行分装,以避免反复冻融, 采集好的样本立刻放入-80℃冰箱进行保存。

  2)小鼠/大鼠粪便样本的采集

  将待取样的小鼠/大鼠放进干净的铺有消毒滤纸的笼子里,排便后立即用灭菌的镊子夹到无菌冻存管中,小鼠粪便样本通常需要 6-8 粒,大鼠粪便样本 1-2 粒,若样本需要重复检测,可用无菌棒混匀后分装成几管,每管至少 200 mg,避免反复冻融,样本采集后立刻放入-80℃冰箱进行低温保存。

  注意事项

  根据样本搜集时实际条件的不同,可依次考虑如下几个搜集方式。其中 A 为金标准,B,C 搜集方式会导致一些代谢物的变化,但也可进行代谢组检测。

  A:样本提供者近 3 个月内不可接受抗生素治疗,以免造成肠道微生物的菌群改变。患者如在家中搜集样本,应该收集完成后迅速放入速冻容器中(干冰盒)并且在 1 天之内将其移到-80℃冻存(金标准)。

  注:短链脂肪酸检测样本只能参照此标准进行取样。

  B:将粪便样本保存在 95%乙醇溶液中,4 天内将其移到-80℃冻存。

  C:将粪便样本保存在干冰中,尽快转入-20℃冰箱保存。

组织的制备

  取大约 200mg 以上质量的组织样本,用生理盐水清洗组织,将每 100mg 组织样本分装入管中以避免反复冻融,尽快将组织样本保存于液氮速冻。如果达不到液氮温度,尽可能的存放在-80℃冰箱中。

  注意事项

  需要注明组织部分,如胃肠道具体哪一段,肺脏具体是哪一叶,肝脏具体是哪一叶,肾脏是髓质还是皮质,肿瘤组织是边缘还是中心等。

尿液的制备

  取尿液大于 1mL,在 4℃保存,静置;取 1mL 尿液进行离心分离,4℃条件下, 10000 rpm,离心 5 min;吸取上清液 100 uL 分装于合适的已编号的 EP 管中, 如此重复分装成多管以避免反复冻融,尽快将尿液保存于-80℃冰箱中。

血清的制备

  用不含抗凝剂的 5 mL 采血管(红头管)或者含有促凝剂的采血管(黄头管) 采集血样 3 mL,或将采好血样的采血管室温静置(注意:不能振摇采血管)30 min-60 min 使其凝结后,再将采血管放入离心机内,4℃条件下 3000 rpm,离心10 min-15 min(可根据试验方案进行适当调整),取出采血管置试管架中(冰上操作),吸取上清液(即血清)100ul 分装于合适的已编号的 EP 管中,如此重复分装成多管血清以避免反复冻融,尽快将血清保存于-80℃冰箱中。

血浆的制备

  用含有 EDTA(紫头管)或肝素(绿头管)的 5 mL 采血管(根据具体实验具体选择)采集血液 3 mL,采血后立即轻轻颠倒混匀采血管 5-10 次,以确保抗凝剂发挥作用,采血后需在 30 min 内尽快离心分离出血浆(若不能尽快离心,采集的血液需放在 4℃冰箱保存,并必须在 8 h 内完成离心及分装),4℃条件下 3000 rpm 离心 10 min-15 min(可根据试验方案进行适当调整),取出采血管置试管架中(冰上操作),吸取上清液(即血浆)100uL 置于合适的已编号的 EP 管中,如此重复分装成多管血清以避免反复冻融,尽快将血浆保存于-80℃冰箱中。

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